使用荧光核酸染料标记植物中DNA含量,随后用流式细胞仪高通量进行植物倍性分析,已经成为植物研究中的常用分析手段[1]。相较传统的根尖压片染色体计数,流式细胞法制备样本简单,无需制备中期染色体,通量高,结果准确,并且可以兼容几乎所有植物的任何组织。使用Sysmex-Partec原厂倍性分析试剂和CellTrics过滤器,只需要:1、切碎2、过滤3、上机三步,2分钟内完成倍性分析实验。使用Sysmex-Partec CyFlow PA对植株基因组大小进行预测,染色体倍性进行预测,对突变株进行倍性鉴定,构建植物进化树。我们使用流式细胞术和成像流式细胞术分析了 10 色双等位基因 Confetti 报告基因。华南地区配备365nm光源倍性分析仪仪器
多光谱成像流式细胞术 (MIFC) 每秒可测量多达 5000 个来自流体悬浮液的粒子,并且可以同时捕获多达 12 张每个单个粒子的图像,用于明场和不同的光谱范围,放大倍率高达 60 倍。MIFC 的高通量具有提高环境监测数量和准确性的巨大潜力,例如目前依赖手动显微方法的植物-传粉媒介相互作用、化石样本、空气、水或食品质量。当 MIFC 与深度学习计算技术相结合时,粒子和细胞的自动识别也是可能的。此外,各种荧光染料可用于染色细胞的特定部位以突出生理和化学特征,包括:花粉或藻类的活力、单个花粉的过敏原含量、细胞的表面化学成分(碳水化合物涂层)、DNA-或酶-活性染色。在这里,我们概述了 MIFC 在各种研究领域和焦点生物的环境研究中的巨大潜力。此外,我们还提供比较好实践建议。花粉或藻类的活力、单个花粉的过敏原含量、细胞的表面化学成分(碳水化合物涂层)、DNA 或酶活性染色。在这里,我们概述了 MIFC 在各种研究领域和焦点生物的环境研究中的巨大潜力。此外,我们还提供比较好实践建议。花粉或藻类的活力、单个花粉的过敏原含量、细胞的表面化学成分(碳水化合物涂层)、DNA 或酶活性染色。国产CyFlow系列倍性分析仪检测时间CyFlow Ploidy Analyser配合试剂盒,非常适合植物倍性检测,两 分钟内即可出结果,明显地缩短了实验周期。
实验仪器:Sysmex CyFlow® Ploidy Analyser 倍性分析仪(Sysmex Partec)试剂盒:CyStain® UV Precise P(Sysmex Partec)实验步骤:1、取新鲜待测植物叶片 0.5 平方厘米,置于培养皿中2. 取 Partec CyStain UV Precise P 裂解液 400ul 加于植物叶片周围,用刀片将叶片切碎,以充分提取出完整的细胞核,持续 30-60 秒3. 将培养皿中的液体用 30um 滤网过滤至样品管中4. 向样品管中加入 Partec CyStain UV Precise P 的 DAPI 染液 1600ul5. 上机(CyFiow Analyser倍性分析仪)检测。
CyFlow Analyser倍性分析仪是一款紧凑型流式细胞仪,可用于植物、动物以及微生物的倍性分析仪、高分辨率DNA和基因组大小分析。由光源、光学系统、液流系统、计算机软件组成。该模块化设备配有365nm的紫外光源和/或532nm的Nd-YAG绿色激光器。仪器配置1或2个具有光电倍增(PMT)的光学参数。适用于PI标准设置和过滤器装置(590nm长通滤波器)和/DAPI/SSC(435nm长通滤波器)液流系统(合成石英流动室专门在层流样本。取样口配备由计算机控制的生物安全清洁系统,避免了样品飞沫。无污染的计算机控制精密注射泵。样品量高达1000ul,且采样速率可在0.2到20ul/s之间进行连续调节。使用方便的鞘液和废液液位传感器。提供2*1升的玻璃瓶用于存放鞘液和废液)CyFlow Analyser倍性分析仪方便快捷,多功能性、高精确性、灵活便捷。
CyFlowPloidyAnalyserDemo倍性分析仪开机前仪器检查:1)在开机之前,需要先确认连接线(包括电源线、鞘液瓶连接线和废液瓶连接线)是否连接正常。2)要确保鞘液瓶至少装有700ml的的鞘液(无菌、已过滤并且去除气泡),然后要把瓶盖旋紧。注意:鞘液太多会导致液流不稳。3)为了保证高质量的检测,建议使用SysmexPartecSheathFluid(orderno.04-4007)。4)建议至少一周更换一次鞘液,或者在每天使用前更换。5)在添加鞘液后,请确保鞘液瓶中的黄色过滤器中没有气泡!6)请确保废液瓶已经清空,并且瓶盖已经旋紧。注意:每个实验人员在使用前和使用后,都请把废液清空。在使用生物毒性样本时,建议在空的废液瓶中加入50ml0.5%次氯酸溶液(OrderNo04-4012),以做初始消毒。分选型流式细胞仪:既能流式分析,还能对分析的目的细胞进行分选。上海高精确性倍性分析仪系统
流式细胞术可以使用适当的方法和 DNA 标准,从而能够以快速、可靠和廉价的方式分析大多数基因组大小范围。华南地区配备365nm光源倍性分析仪仪器
样品的新鲜程度直接影响实验的结果。由于次生代谢产物的影响,会导致信号峰过宽,甚至检测不到信号峰的情况。嫩叶的选择要选择新鲜、完全展开、无虫咬、无枯萎、分裂不活跃的部位。嫩叶的检测效果明显好于较老的叶片。倍性检测首先需要裂解液裂解细胞获得游离细胞核,然后用 DAPI 染液将细胞核染色体上的 A-T 碱基染色,再用倍性分析仪仪器检测细胞核里被染色的 A-T 碱基发出的荧光强度。比如二倍体的荧光强度是 100(横坐标),那么四倍体的荧光强度就是 200(横坐标),如下图所示,用 DAPI 染色法检测蚕豆的倍性。结果的纵坐标是细胞数量的显示,通常来说,信号峰高说明信号比较好,杂质少。华南地区配备365nm光源倍性分析仪仪器
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